【求助/交流】PCR扩增后没有条带是怎么回事?

来源：学生作业帮助网 编辑：作业帮 时间：2024/11/16 00:31:32
【求助/交流】PCR扩增后没有条带是怎么回事?
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【求助/交流】PCR扩增后没有条带是怎么回事?
【求助/交流】PCR扩增后没有条带是怎么回事?

【求助/交流】PCR扩增后没有条带是怎么回事?
PCR反应的关键环节有①模板核酸的制备,②引物的质量与特异性,③酶的质量及,④PCR循环条件.寻找原因亦应针对上述环节进行分析研究.
　　模板：①模板中含有杂蛋白质,②模板中含有Taq酶抑制剂,③模板中蛋白质没有消 化除净,特别是染色体中的组蛋白,④在提取制备模板时丢失过多,或吸入酚.⑤模 板核酸变性不彻底.在酶和引物质量好时,不出现扩增带,极有可能是标本的消化处 理,模板核酸提取过程出了毛病,因而要配制有效而稳定的消化处理液,其程序亦应 固定不宜随意更改.
　　酶失活：需更换新酶,或新旧两种酶同时使用,以分析是否因酶的活性丧失或不够而 导致假阴性.需注意的是有时忘加Taq酶或溴乙锭.
　　引物：引物质量、引物的浓度、两条引物的浓度是否对称,是PCR失败或扩增条带不 理想、容易弥散的常见原因.有些批号的引物合成质量有问题,两条引物一条浓度 高,一条浓度低,造成低效率的不对称扩增,对策为：①选定一个好的引物合成单 位.②引物的浓度不仅要看OD值,更要注重引物原液做琼脂糖凝胶电泳,一定要有引物条带出现,而且两引物带的亮度应大体一致,如一条引物有条带,一条引物无条带,此时做PCR有可能失败,应和引物合成单位协商解决.如一条引物亮度高,一条亮度低,在稀释引物时要平衡其浓度.③引物应高浓度小量分装保存,防止多次冻融或长期放冰箱冷藏部分,导致引物变质降解失效.④引物设计不合理,如引物长度不够,引物之间形成二聚体等.
　　Mg2+浓度：Mg2+离子浓度对PCR扩增效率影响很大,浓度过高可降低PCR扩增的特 异性,浓度过低则影响PCR扩增产量甚至使PCR扩增失败而不出扩增条带.
　　反应体积的改变：通常进行PCR扩增采用的体积为20ul、30ul、50ul.或100ul,应用多 大体积进行PCR扩增,是根据科研和临床检测不同目的而设定,在做小体积如20ul 后,再做大体积时,一定要模索条件,否则容易失败.
　　物理原因：变性对PCR扩增来说相当重要,如变性温度低,变性时间短,极有可能出现假阴性;退火温度过低,可致非特异性扩增而降低特异性扩增效率退火温度过高影响引物与模板的结合而降低PCR扩增效率.有时还有必要用标准的温度计,检测一下扩增仪或水溶锅内的变性、退火和延伸温度,这也是PCR失败的原因之一.
　　靶序列变异：如靶序列发生突变或缺失,影响引物与模板特异性结合,或因靶序列某 段缺失使引物与模板失去互补序列,其PCR扩增是不会成功的.

【求助/交流】PCR扩增后没有条带是怎么回事? 【求助/交流】PCR扩增后没有条带是怎么回事? PCR扩增电泳后为什么没有条带呢 我做的是分子鉴定真菌,用的是通用引物ITS1和ITS4,pcr扩增后只有marker有条带,其他的都没有是什么原因.另外一个真菌能扩增出来条带 为什么我们做PCR扩增后条带出不来?我们做PCR的正交体系,其中有几个样怎么也没有东西出来,其他的部分即使有条带出来 效果也特别不好 PCR扩增产物电泳后显示的条带说明什么? [求助] PCR产物条带很淡最近做的PCR一直条带很淡,已经调了一些条件,还是没有效果. 目前是这样的：目的片段大约2.5kb,退火温度55度,从电泳的结果看来目的条带很整齐,也没有非特异性扩增, PCR扩增出来几条带,怎么改进我扩增的是霉菌18rDNA,大小是1600，PCR体系是50的，条件是94,3min;94,1min;55,1min,72,1min,72,10min.30个循环，按道理来说，电泳后应该只有一条带，但我的有四条带，有三条 琼脂糖凝胶电泳用母液没有条带,而PCR扩增产物有条带,难道是母液的DNA浓度太低,电泳跑不出来? PCR扩增不出来条带的原因? DNA经pcr扩增后电泳出现了三条带是怎么回事?确定没有出现引物二聚体,更不是rna跑的 做DNA PCR扩增,最终结果只有阳性对照有条带出来,其它样本都没有出结果,是因为DNA发生了什么变化吗?开始第一次是有阳性条带跟两条样本条带做出来了。 胶回收：雀式pcr第一对pcr引物扩增后 ,产物电泳得到两条带,那么我该切哪一条啊?怎么知道目的片段的bp?不是目的片段的bp，图片中左边第一条是marker，第五第六条各有两条带，在1000 和1400的 【求助】菌落PCR有目的条带与菌液PCR却什么都没有? 【求助】菌落PCR有目的条带与菌液PCR却什么都没有? 如何确定PCR扩增产物分子量做PCR实验,产物琼脂糖凝胶电泳成像后得一条带,要求与mark对比确定扩增产物分子量. 单克隆验证,菌液PCR有目的条带的位置,但是质粒PCR后,却没有批出我的目的条带这是为什么呀 不同基因组用同一引物扩增,条带一样的原因不同基因组用同一引物PCR扩增,其条带是一样的?