作业帮拟筛选某种微生物最适生长及产物形成的营养条件和培养条件,确定特定产物发酵的工艺参数.设计方案,说明.
来源：学生作业帮助网 编辑：作业帮 时间：2024/11/16 04:20:45
拟筛选某种微生物最适生长及产物形成的营养条件和培养条件,确定特定产物发酵的工艺参数.设计方案,说明.
拟筛选某种微生物最适生长及产物形成的营养条件和培养条件,确定特定产物发酵的工艺参数.设计方案,说明.
拟筛选某种微生物最适生长及产物形成的营养条件和培养条件,确定特定产物发酵的工艺参数.设计方案,说明.
对,对,错,对,对,错,错.
培养基配制的基本过程
1.配制溶液
向容器内加入所需水量的一部分,按照培养基的配方,称取各种原料,依次加入使其溶解,最后补足所需水分.对蛋白胨、肉膏等物质,需加热溶解,加热过程所蒸发的水分,应在全部原料溶解后加水补足.
配制固体培养基时,先将上述已配好的液体培养基煮沸,再将称好的琼脂加入,继续加热至完全融化.并不断搅拌,以免琼脂糊底烧焦.
2.调节pH值
用pH试纸（或pH电位计、氢离子浓度比色计）测试培养基的pH值,如不符合需要,可用10%HCl或10%NaOH进行调节,直到调节到配方要求的pH值为止.
3.过滤
用滤纸、纱布或棉花趁热将已配好的培养基过滤.用纱布过滤时,最好折叠成六层,用滤纸过滤时,可将滤纸折叠成瓦棱形,铺在漏斗上过滤.
4.分装
已过滤的培养基应进行分装.如果要制作斜面培养基,须将培养基分装于试管中.如果要制作平板培养基或液体、半固体培养基,则须将培养基分装于锥形瓶内.
分装时,一手捏松弹簧夹,使培养基流出,另一只手握住几支试管或锥形瓶,依次接取培养基.分装时,注意不要使培养基粘附管口或瓶口,以免浸湿棉塞引起杂菌污染.
装入试管的培养基量,视试管和锥形瓶的大小及需要而定.一般制作斜面培养基时,每只15×150毫米的试管,约装3～4毫升（1/4～1/3试管高度）,如制作深层培养基,每只20×220毫米的试管约装12～15毫升.每只锥形瓶装入的培养基,一般以其容积的一半为宜.
5.加棉塞
分装完毕后,需要用棉塞堵住管口或瓶口.堵棉塞的主要目的是过滤空气,避免污染.棉塞应采用普通新鲜、干燥的棉花制作,不要用脱脂棉,以免因脱脂棉吸水使棉塞无法使用.制作棉塞时,要根据棉塞大小将棉花铺展成适当厚度,揪取手掌心大小一块,铺在左手拇指与食指圈成的圆孔中,用右手食指插入棉花中部,同时左手食指与姆指稍稍紧握,就会形成1个长棒形的棉塞.棉塞作成后,应迅速塞入管口或瓶口中,棉塞应紧贴内壁不留缝隙,以防空气中微生物沿皱折侵入.棉塞不要过紧过松,塞好后,以手提棉塞、管、瓶不下落为合适.棉塞的2/3应在管内或瓶内,上端露出少许棉花便于拔取.塞好棉塞的试管和锥形瓶应盖上厚纸用绳捆札,准备灭菌.
6.制作斜面培养基和平板培养基
培养基灭菌后,如制作斜面培养基和平板培养基,须趁培养基未凝固时进行.
(1)制作斜面培养基.在实验台上放1支长0.1米左右的木条,厚度为1厘米左右.将试管头部枕在木条上,使管内培养基自然倾斜,凝固后即成斜面培养基.
(2)制作平板培养基.将刚刚灭过菌的盛有培养基的锥形瓶和培养皿放在实验台上,点燃酒精灯,右手托起锥形瓶瓶底,左手拔下棉塞,将瓶口在酒精灯上稍加灼烧,左手打开培养皿盖,右手迅速将培养基倒入培养皿中,每皿约倒入10毫升,以铺满皿底为度.铺放培养基后放置15分钟左右,待培养基凝固后,再5个培养皿一叠,倒置过来,平放在恒温箱里,24小时后检查,如培养基末长杂菌,即可用来培养微生物.
一、平板划线分离法
由接种环以菌操作沾取少许待分离的材料,在无菌平板表面进行平行划线、扇形划线或其他形式的连续划线,微生物细胞数量将随着划线次数的增加而减少,并逐步分散开来,如果划线适宜的话,微生物能一一分散,经培养后,可在平板表面得到单菌落.
二、稀释倒平板法
先将待分离的材料用无菌水作一系列的稀释（如 1 ∶ 10 、 1 ∶ 100 、 1 ∶ 1000 、 1 ∶ 10000 …）,然后分别取不同稀释液少许,与已溶化并冷却至 45 ℃左右的琼脂培养基混合,摇匀后,倾入灭过菌的培养皿中,待琼脂凝固后,制成可能含菌的琼脂平板,保温培养一定时间即可出出菌落.如果稀释得当,在平板表面或琼脂培养基中就可出现分散的单个菌落,这个菌落可能就是由一个细菌细胞繁殖形成的.随后挑取该单个菌落,或重复以上操作数次,便可得到纯培养.
三、单孢子或单细胞分离法
采取显微分离法从混杂群体中直接分离单个细胞或单个个体进行培养以获得纯培养,称为单细胞（单孢子）分离法.单细胞他离法的难度与细胞或个体的大小成反比,较大的微生物如藻类、原生动物较容易,个体较小的细菌则较难.在显微镜下使用单孢子分离器进行机械操作,挑取单孢子或单细胞进行培养.也可以采用特制的毛细管在载玻片的琼脂涂层上选取单孢子并切割下来,然后移到合适的培养基进行培养.单细胞分离法对操作技术有比较高的要求,多限于高度专业化的科学研究中采用.
四、利用选择性培养基分离法
各种微生物对不同的化学试剂、染料、抗生素等具有不同的抵抗能力,利用这些特性可配制合适某种微生物而限制其它微生物生长的选择培养基,用它来培养微生物以获得纯培养.
另外,还可以将样品预处理,消除不希望分离到的微生物.如加温杀死营养菌体而保留芽孢,过滤去除丝状菌体而保留单孢子.
营养条件包括碳源 氮源 生长因子 （诱导底物）等
培养条件包括温度 ph 发酵时间 接种量 装液量 摇床转速等
要确定最佳的条件 需要做单因素试验 查看不同物质 或者同种物质不同量对产物及生长的影响
想要确定综合条件的影响 就要根据单因素试验结果做正交试验 或者是pb试验、响应面法（响应面法是现代微生物条件优化最合理最科学的方法了），查看所有影响因素的相互作用对产物形成及...
全部展开
营养条件包括碳源 氮源 生长因子 （诱导底物）等
培养条件包括温度 ph 发酵时间 接种量 装液量 摇床转速等
要确定最佳的条件 需要做单因素试验 查看不同物质 或者同种物质不同量对产物及生长的影响
想要确定综合条件的影响 就要根据单因素试验结果做正交试验 或者是pb试验、响应面法（响应面法是现代微生物条件优化最合理最科学的方法了），查看所有影响因素的相互作用对产物形成及生长的影响
测定微生物生长 可以考虑用分光光度计法测定不同时间的生长od值
测定产物的形成 就要看你希望得到的产物是什么东西了，根据物质的性质设计测定反应，如果是蛋白 或者酶 可以通过酶促反应试验测得产物的生成量。
收起
先实验室摇瓶确定发酵底物和培养基是什么。葡萄糖？淀粉？或者其他。
产物通过HPLC、质谱或者其他测定法确定含量和产率。初试培养的温度、pH、盐度可以采用普通的条件，或者有文献可参考就更好了。
培养基定下后再做温度、pH、盐度的梯度实验，以确定最佳温度、PH、盐度。
然后在最佳条件下中试。摸索发酵过程的控制，比如补加液流量、曝气量、pH调节等等。
中试完了那就上大罐终...
全部展开
先实验室摇瓶确定发酵底物和培养基是什么。葡萄糖？淀粉？或者其他。
产物通过HPLC、质谱或者其他测定法确定含量和产率。初试培养的温度、pH、盐度可以采用普通的条件，或者有文献可参考就更好了。
培养基定下后再做温度、pH、盐度的梯度实验，以确定最佳温度、PH、盐度。
然后在最佳条件下中试。摸索发酵过程的控制，比如补加液流量、曝气量、pH调节等等。
中试完了那就上大罐终试吧。
收起