实时荧光定量PCR中两种引物的设计有什么要求?

来源：学生作业帮助网 编辑：作业帮 时间：2024/11/15 22:26:49
实时荧光定量PCR中两种引物的设计有什么要求?
xT[OX+8P UW.7>WbT¥!M%rqqY9y/윌XiRDĜLMS_\68A̽fn]4s (o]ͺ&l2b=kSK nn; KW cB`BBֻ{QR|P.6 {}&e&Nq_8s/eAE-(j2D>h9 mJxMx$;E'%jQ3ܒ1L)3ce Egdtq&kT]K GIJк9i5B:dI-3H_-]^NH;4! ^U|=>?Cex<ǿW} 7U `+'4iek?0$nD"HXPy"`?8TF&KC<uv'Ioj[8 +mv'|ȿv;I3

实时荧光定量PCR中两种引物的设计有什么要求?
实时荧光定量PCR中两种引物的设计有什么要求?

实时荧光定量PCR中两种引物的设计有什么要求?
参照以下real-time PCR引物设计原则：
1.最好位于编码区5’端的300-400bp区域内,可以用DNAman,Alignment 软件看看结果.
2.产物不能形成二级结构（自由能小于58.61KJ/mol）.
3.引物长度一般在17-25碱基之间,上下游引物不能相差太大.
4.G+C含量在40%~60%之间,45-55％最佳.
5.碱基要随机分布,尽量均匀.
6.引物自身不能有连续4个碱基的互补.
7.引物之间不能有连续4个碱基的互补.
8.引物5′端可以修饰.
9.3’端不要以A结尾,3′端不可修饰,而且要避开AT,GC rich的区域,避开T/C,A/G连续结构（2-3个）.
10.引物3′端要避开密码子的第3位.
11.引物整体设计自由能分布5‘端大于3’端,且3‘端自由能最好小于9KJ/mol.可用oligo 6 软件进行比对看结果的情况.
12.做荧光定量产物长度80-150bp最好,最长是300bp.
13.引物设计避免DNA污染,最好跨外显子接头区.
14.引物与非特异性扩增序列的同源性最好小于70％或者有8个互补碱基同源.
15.查看有无假基因的存在.假基因就是无功能的DNA序列,与需要扩增的目的片段长度相似.
16.TM值在55-63度之间.
17..引物与非特异性扩增序列的同源性最好小于70％或者有8个互补碱基同源.

去查别人文献用过的引物才是王道

实时荧光定量PCR中两种引物的设计有什么要求? 实时荧光定量PCR 引物与普通PCR一样吗两者间用的引物有什么区别,可以用一样的序列去设计吗 实时荧光定量pcr中 sybgreen染料法 tacman探针 半定量PCR的 引物设计有什么区别 可以通用么如题：引物有什么区别,能否通用 ,除了查文献外还可以如何设计引物 实时荧光定量PCR 的引物能不能用来做RT 实时荧光定量PCR和梯度PCR有什么区别 怎么用primer express3.0设计实时荧光定量PCR引物,能不能提供具体的操作流程 已知序列的ORF（有内含子）和3'UTR,做实时荧光定量PCR从哪里设计引物可以排除DNA干扰 荧光定量PCR的Tapman 探针引物怎么设计 荧光定量PCR和实时荧光定量PCR的区别? 请问末端标记的荧光PCR是定量PCR吗?什么又是实时PCR、实时定量PCR呢? 实时荧光定量PCR技术的原理什么? 请问用实时荧光定量PCR法能测定甲状腺激素总受体的mRNA的表达情况吗?甲状腺激素受体有四个亚型 可以设计这四个亚型的总引物吗? 实时荧光定量PCR注意事项 请教实时荧光定量PCR高手,我想做两个物种的鼠的同一基因的相对定量并比较,请问引物设计应该注意什么因为这两个老鼠的目标基因CDS区序列不是完全相同,想要根据CDS区设计引物 需要注意什 荧光定量pcr引物有多少引物二聚体合适... 设计实时定量PCR引物是根据基因的全长设计引物还是根据基因的开放阅读框设计引物? 荧光定量PCR引物和探针怎么设计? 做实时荧光定量PCR对人体是否有危害实时荧光定量PCR的染料、探针等试剂药品是否有毒,是否会对人体造成危害?