流式细胞仪-调节荧光补偿是不是把其他颜色荧光都调到零是最好的?我用Annexin V-FITC和PI双染检测细胞凋亡,结果细胞给药后,细胞团层45度角向上偏,是不是荧光补偿没有调好,但是我的荧光补偿

来源：学生作业帮助网 编辑：作业帮 时间：2024/11/16 14:37:00
流式细胞仪-调节荧光补偿是不是把其他颜色荧光都调到零是最好的?我用Annexin V-FITC和PI双染检测细胞凋亡,结果细胞给药后,细胞团层45度角向上偏,是不是荧光补偿没有调好,但是我的荧光补偿
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流式细胞仪-调节荧光补偿是不是把其他颜色荧光都调到零是最好的?
我用Annexin V-FITC和PI双染检测细胞凋亡,结果细胞给药后,细胞团层45度角向上偏,是不是荧光补偿没有调好,但是我的荧光补偿选中GRE时,RED调到最低；选中RED时,GRE调到最低；其实我对荧光补偿的原理不是很清楚,不知道这样调是不是对的,可不可以用比较容易懂的语言解释一下荧光补偿的原理,然后针对我这个结果,我应该如何调节荧光补偿?（上图是给药组,下图是正常组）

流式细胞仪-调节荧光补偿是不是把其他颜色荧光都调到零是最好的?我用Annexin V-FITC和PI双染检测细胞凋亡,结果细胞给药后,细胞团层45度角向上偏,是不是荧光补偿没有调好,但是我的荧光补偿
荧光补偿是因为每个荧光的光谱都比较宽.用你的例子来说,就是PI的荧光,不仅被PI这个通道的探测器所感应到,而且也同时被FITC的探测器感应到,所以一个PI染色会出现在双染的区域.另外FITC的荧光,也会同时被两个探测器所检测到.这时候就要做compensation.
你做compensation的时候,必须有3个管子,一个是无染料的,一个只染了PI的,另外一个只染了FITC.第一个管子,原来调节FL-1和FL-2的电压,是所有细胞都位于左下象限.然后保持电压不变,上FITC的管子,调节compensation 的数值(FL-2 - FL-1%）,使FITC阳性的细胞都位于右下象限,但是在水平位置上和阴性细胞一致,而不是最低.然后再上PI的管子,调节compensation数值,使PI阳性的细胞都位于左上象限.在垂直位置上和阴性细胞一致,但不是最低.
简单的说,就是把单个阳性的染色放到属于原来自己的位置上.
只有这个设置好了,才能往下做实验.
从你的图上看,你四个象限的设置并没有用无染色的细胞来设置.PI的阳性阈值设的很高.参照是什么?FITC的参照阈值是什么?这些都必须用无染色的细胞来设置.

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