再设计引物时,添加酶切位点和标签后,正反两个引物相差20个碱基,但在添加前相差不大,

来源：学生作业帮助网 编辑：作业帮 时间：2024/11/06 11:20:52
再设计引物时,添加酶切位点和标签后,正反两个引物相差20个碱基,但在添加前相差不大,
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再设计引物时,添加酶切位点和标签后,正反两个引物相差20个碱基,但在添加前相差不大,
再设计引物时,添加酶切位点和标签后,正反两个引物相差20个碱基,但在添加前相差不大,

再设计引物时,添加酶切位点和标签后,正反两个引物相差20个碱基,但在添加前相差不大,
标签是指的表达标签么?如果是表达标签的话,载体上没有么?通常表达标签不是通过引物引入的,而是载体本来带有的,这个需要确认一下.
另外,引物的使用主要是看Tm值的差异,如果设计后,两条引物的Tm值相差过大,是不能够使用的,因为在退火时,找不到合适的退火温度.因此不能简单通过长短进行判断,需要根据两条的Tm值比较.一般引物设计软件上都有,如果相差太大,没法用.
另外,引物的长度也是有一定的限制的,20-35的长度比较理想,过长和过短都会个扩增带来麻烦,限制相差就差了20个,感觉有条引物太长了.确认下,标签是不是一定要带在上面.

标签是啥 相差20个那得有40多bp？ 太长了吧。。。。

个人经验,其实无所谓.我在后面加过18bp的一段序列，没问题。

前面10个循环把退火温度适当的低一点,用你没加标签,没加位点的退火温度,然后再用高的退火温度扩20-30个循环,一般是没有什么问题的。引物只能这样设计了，不好用也只能用这个了。...

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个人经验,其实无所谓.我在后面加过18bp的一段序列，没问题。

前面10个循环把退火温度适当的低一点,用你没加标签,没加位点的退火温度,然后再用高的退火温度扩20-30个循环,一般是没有什么问题的。引物只能这样设计了，不好用也只能用这个了。

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再设计引物时,添加酶切位点和标签后,正反两个引物相差20个碱基,但在添加前相差不大, 有关PCR引物设计好像引物设计好以后,还要添加什么保护碱基,有时还要添加酶切位点,这些东西添加进去后,不是无法和模板链连接起来了吗?除非是把引物设计的所有要求统一起来,在模板链上 加HIS标签的引物如何设计 如何设计带flag标签的引物 已知基因SCN2B,怎样用primer5设计引物,并添加酶切位点（Xho I-CCTCGAGG需标出）,写出引物序列和条件? 克隆引物和表达时引物设计的区别 如何用PP5给设计好的引物添加限制性酶切位点 【求助】请教：加HIS标签的引物如何设计 您好!我想问一下：在做原核表达的时候,设计引物是不是还要加标签和启动子.还是载体本事就带有标签和启动子啊! 引物的设计原则引物设计原则和具体步骤!原理! 引物设计如何加入酶切位点 引物设计如何加入酶切位点 引物设计时如何添加酶切位点 引物设计时如何添加酶切位点 PCR扩增基因设计引物时,用Primer5检测上游引物和下游引物的互补性,显示free energy= 1.50 Kcal/mol这样的引物可用吗? 引物设计问题,以mRNA序列设计引物,然后用cDNA为模板来扩增,在设计引物时mRNA序列是否要反转序列?我想的是,不反转的话设计的引物是和mRNA互补的,而mRNA合cDNA,这样的话设计的引物就不和cDNA互 pcr引物设计为什么要引入酶切位点 做PCR时,怎么设计引物?