RFLP与 T-RFLP的区别

来源：学生作业帮助网 编辑：作业帮 时间：2024/11/05 19:43:18
RFLP与 T-RFLP的区别
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RFLP与 T-RFLP的区别
RFLP与 T-RFLP的区别

RFLP与 T-RFLP的区别
RFLP是限制性片段长度多态性,它是根据不同生物个体或种群之间DNA片段酶切位点有所差异的特点,利用限制性内切酶进行消化,得到长短、种类、数目不同的限制性片段,然后对这些特定DNA片段的限制性内切酶产物进行分析.但是该技术需要依赖Southern 技术,克隆基因作探针,工作量很大；而且DNA用量较大,纯度要求高.
T-RFLP是末端限制性片段长度多态性,它是根据16S rRNA的保守区设计通用引物.其中一个引物的5 端用荧光物质标记,常用荧光物质有HEX、1’ET、6．FAM等.提取待分析样品的总DNA,以它为摸板进行PCR扩增,所得到的PCR产物一端就带有这种荧光标记.然后,将PCR产物用合适的限制性内切酶消化,一般选用酶切位点为4bp的限制性内切酶.由于在不同细菌的扩增片段内存在核苷酸序列的差异,酶切位点就会存在差异,酶切后就会产生许多不同长度的限制性片
段.消化产物用自动测序仪(选用genescan功能)进行检测,只有末端带荧光标记的片段能被检测到,而其他没有带荧光标记的片段则检测不到.这些末端标记的片段就可以反映微生物群落组成情况,因为不同长度的末端限制性片段必然代表不同的细菌,也就是说一种末端限制性片段至少代表一种细菌.

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